Dosage immunoenzymatique (elisa) du virus de la mosaique du concombre I-Aspect methodologique

Overview & Synopsis

Le test immunoenzymatique ELISA (type « sandwich ») peut être utilisé pour le dosage du virus de la mosaïque du concombre (CMV) à condition de se placer dans des conditions expérimentales strictement définies qui sont indispensables si l’on veut obtenir une précision acceptable dans les estimations fournies par la méthode. Une étude réalisée avec des préparations de CMV purifié stabilisé fait en effet apparaître des variations importantes dans les valeurs de densité optique (D.o.) enregistrées pour une même concentration en antigène. Les variations que l’on observe avec les deux types de support étudiés (plaques MICROELISA et cuvettes PAK) sont souvent liées à la position des puits ; elles limitent sensiblement les possibilités de dosage. Il est possible de remédier en partie à ces inconvénients en éliminant des puits situés en bordure, en prenant en considération les différences de densité optique (∆ D.o.) entre deux lectures successives et en procédant, pour chaque extrait analysé, à plusieurs mesures selon un schéma de dépôt préalablement établi (cas des cuvettes PAK). Dans ces conditions, les coefficients de variation sont inférieurs à 10 p. 100 pour des teneurs en antigène comprises entre 250 et 25 ng/ml. Dans cette gamme de concentrations, il existe une bonne corrélation linéaire (au seuil 0,01) entre les valeurs de ∆ D.o. et les log. des concentrations en virus. Ainsi, une droite de régression, établie à partir des ∆ D.o. correspondant à 4 dilutions d’une préparation antigénique « standard » permet, par comparaison, d’estimer la teneur en virus d’un extrait inconnu. Il suffit d’incorporer un seul « standard » dans chaque essai, les droites de régression établies dans plusieurs cuvettes étant en général parallèles. En revanche, la mauvaise reproductibilité de la méthode, due vraisemblablement à des variations dans les conditions d’hydrolyse du substrat, nécessite de disposer d’un « standard » dans chaque essai. En raison de l’instabilité du virus de la mosaïque du concombre, la préparation « standard utilisée dans plusieurs essais successifs doit obligatoirement être stabilisée par le formaldéhyde. Les conséquences de cette stabilisation sur le comportement du virus en ELISA sont discutées. En dépit de ces imperfections, le test immunoenzymatique ELISA apparaît comme la méthode actuellement la mieux adaptée pour le dosage rapide du virus de la mosaïque du concombre dans le cadre de l’analyse systématique d’un grand nombre d’échantillons.