Développement de nouvelles sondes photoactivables pour la caractérisation des cibles cellulaires du glutathion

Overview & Synopsis

Le glutathion (GSH et GSSG) joue un rôle prédominant dans l apoptose (mort cellulaire programmée) un phénomène déficient dans certains cas de cancer. L action du glutathion est étroitement liée à plusieurs protéines qui ont une affinité pour ce tripeptide ( Glu-Cys-Gly sous sa forme réduite) et qui constituent le système du glutathion. Une méthode de marquage par photoaffinité n utilisant pas de radioisotopes a été choisie pour identifier ces nouvelles protéines. Pour cela nous avons synthétisé de nouvelles sondes photoactivables dont le but est de se lier à différentes molécules biologiques notamment, dans notre cas, le glutathion. L irradiation de ce matériel biologique en présence de ces sondes photoactivables va permettre la formation d une liaison covalente entre les protéines ayant une affinité pour le glutathion et le glutathion lui-même. L étape suivante qui consiste en une ligation de Staudinger avec la biotine ou en une réaction de Click Chemistry avec une biotine modifiée, va permettre la visualisation et l identification de ces protéines cibles ainsi que de leur site de liaison. Deux méthodes de détection ont été envisagées¡: - La chimiluminescence : la présence de la biotine permet une détection aisée via une procédure bien connue qui utilise le complexe streptavidin-peroxydase et le luminol - La fluorescence : le couplage d un composé fluorescent à la sonde permet une détection.